Диагностика цирковируса попугаев безопасна, доступна и легковыполнима, но есть ряд важных особенностей, которые могут повлиять на выявление вируса и постановку диагноза.
Методы диагностики цирковируса у живых попугаев.
Для диагностики цирковирусной инфекции применяется метод гемагглютинации, гистологический метод, электронная микроскопия и ПЦР.
Реакция гемагглютинации.
Цирковирус в крови живой птицы можно обнаружить методом гемагглютинации. Однако этот анализ доступен только во время исследовательских работ лишь в некоторых университетах США и ЕС.
Гистологические исследования.
Вирус можно обнаружить гистологическим методом. Для анализа берется кусочек кожи (биопсия) или растущее перо. Анализ делается 14 дней, и имеет хорошую специфичность (т.е. тельца-включения сложно перепутать с другими вирусами). Однако сложность этого анализа заключается в том, что не каждый гистолог сможет найти характерные вирусные внутрицитоплазматические тельца-включения в таком материале.
Чувствительность у гистологического анализа низкая, т.е. вероятность обнаружения специфических изменений у птиц без клинических признаков болезни довольно мала. Кроме того, специалистов гистологов очень мало, поэтому этот вид диагностики в СНГ почти не применяется.
Метод электронной микроскопии не применяется в СНГ по причине отсутствия электронных микроскопов в ветеринарных лабораториях.
ПЦР
Основным методом диагностики цирковироза является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Этот метод легкодоступен. Исследуются: перо, кровь, помет, мазки из клоаки, мазки из зоба. ПЦР высокоспецифична, т.е. вероятность получения ложноположительного результата равна нулю.
Положительный результат анализа — вирус обнаружен. Ошибочного обнаружения вируса быть не может.
Отрицательный результат анализа — вирус не найден в исследованном материале. Возможно вирус у птицы есть, но в предоставленном образце его не обнаружили.
Почему же возникает так много споров вокруг темы: «в одной лаборатории результат положительный, а в другой — отрицательный»? Всё дело в разном количестве вирусных частиц в исследуемом материале.
От чего зависит количество вируса?
Разное количество вируса в материале связано с неодинаковым распределением вируса в органах птицы. Количество вируса в тканях меняется в зависимости от стадии заболевания. Максимальное количество цирковируса в крови и в других тканях наблюдается в период активного развития инфекции (стадия виремии). В этот период вирус не только в большом количестве находится в различных органах, но и в большом количестве выделяется с помётом. Клинически этот период совпадает с началом нарушения развития маховых и хвостовых перьев, продолжается несколько месяцев. Это заболевшие птицы.
У некоторых переболевших птиц болезнь переходит в стадию носительства. Внешне оперение у носителей почти нормальное, «почти » — это потому, что опытный ветеринарный врач, работающий с птицами, в большинстве случаев видит проплешины, изменения в цвете оперения, затруднения раскрытия трубочек растущих перьев, изменение цвета и структуры клюва и когтей. На стадии носительства вирус мало выделяется с помётом, в крови его очень мало или нет вообще, но он хорошо сохраняется в пере и в коже. Для владельцев птиц очень важно знать, что кроме небольших проблем с пером у таких птиц огромные проблемы с иммунной системой — попугай очень восприимчив к развитию вторичных заболеваний и поэтому крайне важно регулярно проводить обследования птицы и делать всё возможное для профилактики болезней.
Для покупателей птиц важно знать, что большинство попугаев, продающихся и в зоомагазинах, и напрямую у заводчиков, и на «авито» и др. торговых площадках — это те самые выжившие бессимптомные носители цирковируса. Эти птицы может быть сами уже не заболеют, но большинство птенцов от них будут погибать (оставшиеся будут носителями), а здоровые попугаи — заражаться. Поэтому важно сделать анализ на цирковирус перед покупкой попугая, а при получении отрицательного результата анализа желательно повторить анализ хотя бы еще один раз.
Почему ПЦР анализ важно делать несколько раз?
Вирус не всегда выделяется в больших количествах и поэтому в исследуемом материале его может быть недостаточно для обнаружения, тогда анализ будет ложноноотрицательным (т.е. вирус был, но его не нашли). В результате проведения большого количества исследований по сравнению разных методов диагностики цирковироза стало известным, что наибольшее количество вируса (как у больных , так и у клинически здоровых попугаев) содержится в пере. Много вируса удается выделить из мазков из клоаки. Помет находится на третьем месте по успешности обнаружения цикровируса. И лишь в части случаев вирус удается обнаружить в крови.
В 2004 году в журнале Avian Pathology была опубликована статья Александры Скоп и Ульрика Хейнца «Comparitive sensitivity of polymerase chain reaction diagnosis of psittacine beak and feather disease on feather samples, cloacal swabs and blood from budgerigars (Melopsittacus undulates, Shaw 18005).» В этой статье приведены результаты сравнительного исследования по обнаружению цирковируса методом ПЦР у больных и клинически здоровых волнистых попугайчиков. Сравнивалась эффективность обнаружения вируса при исследовании пера, мазков из клоаки, крови.
На протяжении 9 месяцев обследовалось группа из 15 волнистых попугайчиков. Стая была помещена в карантинные условия после того, как у некоторых из птиц были обнаружены проблемы развития хвостовых перьев, оперения на крыльях.
У птиц регулярно брали кровь, перо из хвостовой области, мазки из клоаки для исследования методом ПЦР на наличие ДНК цирковируса. Пробы были взяты в день прибытия на карантин, через 10 дней, и далее на 4, 10, 16, 28 и 36 неделе нахождения птиц в карантине. 2 попугая из 15 погибли на 7 и 17 день карантина. При патологоанатомическом исследовании гистологическим методом и методом ПЦР у них была подтверждена цирковирусаная инфекция.
В результате проведенного исследования у всех попугаев в стае обнаружена ДНК цирковируса. Чаще всего вирус удавалось выделить из пера (пробы пера были положительны в 67%; мазки из клоаки — в 45%; и лишь 21% образцов крови содержали ДНК вируса).
Выделение вируса из крови:
У трех молодых попугайчиков ДНК вируса была обнаружена только в первых двух пробах крови (на 0 и 10 день) за 9 месяцев исследования. У двух самых больных попугаев (с наиболее выраженными проблемами с оперением, которые сохранялись почти на всем протяжении карантина) кровь была положительна чаще всего. У 6 птиц без выраженных клинических признаков инфекции кровь ни разу не была положительна. У 4 птиц в первые 10 дней карантина только кровь была положительна (в пере, в мазках из клоаки вирус не обнаруживался); у 3 из этих 4 попугаев клинические признаки заболевания имелись только в начале исследования, а у четвертого клинических признаков болезни не было вообще. Через 9 месяцев наблюдения у всех птиц вирус в крови не обнаруживался.
Таким образом, степень виремии выше при развитых клинических признаках болезни (т.е. чем меньше здоровых перьев, тем больше шанс найти цирковирус в крови попугаев).
Выделение вируса из мазков из клоаки:
За 9 месяцев исследования как минимум один раз ДНК вируса была обнаружена у всех попугаев в мазках из клоаки. У 2 птиц мазки из клоаки были положительны в 85% проб. У 4 — мазок из клоаки был положительный только один раз (14% проб) за все время исследования и это было в первые 10 дней после начала карантина.
Выделение вируса из пера:
У 2 птиц перо было положительно все 9 месяцев исследования (100%). У 2 других птиц перо было положительно в 6 из 7 проб (85%). У 4 птиц перо было положительно в 5 из 7 проб (71%). У 1 птицы положительный результат исследования пера был получен только 1 раз и только в первые 10 дней карантина (14%).
Важно !!! Цирковирус обнаруживался в уже развившемся пере. Т.е. не обязательно сдавать на анализ только растущие перья. Данный факт является показателем опасности заражения других птиц через перо.
При первом исследовании были положительны: 10 образцов пера (76% проб), 9 мазков из клоаки (69%) и только 6 образцов крови (46%). У 4 птиц вирус обнаруживался в крови на протяжении 10 дней, в дальнейшем виремия была обнаружена только у 3 птиц. Примечательно, что обнаружение вируса в крови сопутствовало явным клиническим признакам.
При этом большинство анализов пера и помёта были положительны даже у птиц без клинических признаков заболевания.
Выводы.
Как видно из исследования, ни один из методов не дал стабильной 100% вероятности обнаружения цирковируса у больных попугаев на всем протяжении карантина. Только комбинация всех трех методик и повторные серии анализов повышали шансы обнаружения вируса.
В других проведенных исследованиях вирус удавалось обнаружить методом ПЦР в пере 39,2% клинически здоровых попугаев, содержащихся у заводчиков в Германии. Также есть данные исследований, в которых авторам удавалось обнаружить цирковирус методом ПЦР в помете 26% больных птиц.
Более высокая частота выявляемости цирковируса из помёта, чем из крови, объясняется эпителиотропной природой вируса. Это подтверждается работой Ramis и соавторов, в которой исследователи обнаруживали ДНК вируса в тканях зоба, мускульного желудка, кишечника. Также, вероятность обнаружения цирковируса в помёте и в мазках из клоаки выше, чем при анализе крови, потому что у больных птиц поражается фабрициева сумка, которая является главным органом, который поражается при цирковирозе попугаев.
Самый главный вывод: если у попугая обнаружен цирковирус — значит он у него есть. Если цирковирус не обнаружен, надо сделать еще несколько анализов, исследуя разные образцы: перо, помет, мазки из зоба, мазки из клоаки, кровь. Только после получения нескольких отрицательных ответов можно быть уверенным, что цирковирус у попугая отсутствует.
Ветеринарный врач Козлитин В.Е.
На заглавном фото больные цирковирусом ара макао или красные ара (Ara macao).
Использованная литература:
1. Michael Hess, Alexandra Scope & Ulrike Heincz (2004) Comparitive sensitivity of polymerase chain reaction diagnosis of psittacine beak and feather disease on feather samples, cloacal swabs and blood from budgerigars (Melopsittacus undulates, Shaw 18005), Avian Pathology, 33:5, 477-481, DOI: 10.1080/03079450400003619
2. A. Ramis, K. S. Latimer, F. D. Niagro, R. P. Campagnoli, B. W. Ritchie & Denise Pesti (1994) Diagnosis of psittacine beak and feather disease (PBFD) viral infection, avian polyomavirus infection, adenovirus infection and herpesvirus infection in psittacine tissues using DNA in situ hybridization, Avian Pathology, 23:4, 643-657, DOI: 10.1080/03079459408419034
3.Rahaus M, Wolff MH. Psittacine beak and feather disease: a first survey of the distribution of beak and feather disease virus inside the population of captive psittacine birds in Germany. Journal of Veterinary medicine. B, Infectious Diseases and Veterinary Public Health. 2003 Oct;50(8):368-371. DOI: 10.1046/j.1439-0450.2003.00696.x.
4.Pass, D.A. & Perry, R.A. (1984). The pathology of psittacine beak and feather disease. Australian Veterinary Journal, 61, 69/74.