Культуральные методы диагностики для постановки диагноза аспергиллез птиц используются в комплексе с: данными рентгенографических исследований, эндоскопии, цитологических и гистологических данных, анализов крови.
Для этого исследуют мазки из зоба, клоаки, посевы суспензированного помета, посевы с полученного при эндоскопии материала.
Статья — Общие вопросы об аспергиллезе птиц.
Культуральный метод — стадия бактериологических исследований. Для выявления и определения возбудителя инфекционного заболевания проводят посев материала от больной птицы на питательные среды. После выделения культуры (чистых образцов микроорганизмов) проводят дальнейшее лабораторное изучение свойств и определение возбудителя.
Что значит положительный результат бактериологического анализа помета (грибки выделены)
1. Птица больна: обнаруженные плесневые грибки выделяются из дыхательных путей птицы: легких, бронхов и воздушных мешков.
2. Птица живет в неблагоприятных условиях, в которых повышена концентрация спор грибков.
Положительный ответ микологического анализа обозначается в бланке лаборатории фразами: «обнаружен рост плесневых грибов», «обнаружен грибковый мицелий», «обнаружены споры плесневых грибков». Ответ зависит от лаборатории и метода исследования. Часто в лаборатории не определеяют точный вид плесневых грибков, пишут например: «выделен Aspergillus spp», или «Mucor spp», или «Penicillum spp», — все эти роды грибков могут вызывать системную инфекцию и болезни у птиц. Поэтому, если выделен какой-то грибок неотносящийся к аспергиллам, считать, что результат анализа отрицательный — нельзя.
Анализ выполнялся двумя методами: микроскопическим (образец рассматривается под микроскопом) и бактериологическим (производится посев на специальные микробиологические среды для выделения грибков). Дублирование исследования двумя разными методами значительно повышает шансы на обнаружение грибков в помете птиц.
В данном случае выделен мицелий плесневых грибков и споры грибков, а позже установлен род плесневого грибка — Alternaria spp; «spp» (species) означает, что определить грибок до наименовия вида не удалось. Лаборатория и врачи, неработающие с птицами, скорее всего сделают вывод, что это отрицательный результат анализа, так как многие виды грибков альтернарий в норме живут на растительном материале, на ветках и листьях. И только птичьи врачи, специализирующиеся на лечении птиц (а не «врачи-орнитологи» и не «орнитологи» /об этом в статье Лечение птиц/ ), поймут, что в данном случае ответ лаборатории положительный, так как грибки Alternaria могут вызывать системные и/или локальные микозы у птиц. В данном рассматриваемом сейчас случае у попугая выделены еще и кандиды Candida spp, которые могут самостоятельно вызывать инфекции у попугаев и других птиц, но чаще всего эти дрожжи осложняют течение других болезней попугаев.
Что значит отрицательный результат бактериологического анализа помета (грибки не выделены)
Это значит, что споры грибков не обнаружены, а не то, что их нет; т.е. — отрицательный ответ не позволяет сделать однозначных выводов. Споры грибков в помете, как и «в мазках», могут быть не обнаружены из-за их малого количества в материале, из-за гибели спор в процессе транспортировки, из-за разведения материала транспортной средой.
Бланк ответа лаборатории, выполнявшей бактериологический анализ помета попугая в Москве. В ответе указано: в исследуемом материале патогенных грибов не обнаружено.
Системные микозы у птиц могут вызываться не только грибками рода Aspergillus, но и грибками рода Mucor и другими грибками. Поэтому нельзя списывать на контаминацию материала выделение родов и видов грибков отличных от Aspergillus niger/flavus/fumigatus. Повторное выделение одного и того же вида грибков из исследуемого материала, полученного от птицы, может говорить о системном микозе, а не о случайном транзите грибковых спор через пишеварительный тракт птицы.
Откуда в исследуемых образцах могут появиться случайные споры грибков?
1. Контаминация спорами из окружающего воздуха. Споры грибков всегда находятся в воздухе вокруг нас.
Какие меры необходимо предпринимать для исключения этого фактора:
а. Пользоваться стерильными зондами и транспортными средами. Чем меньше время экспозиции зонда на воздухе, тем меньше вероятность обсеменения спорами грибков.
b. Собирать помет птицы на чистую целлофановую пленку, постеленную под присадой. Как только помет получен целлофановая пленка сворачивается «конвертом», упаковывается в другой чистый целлофановый пакет и отвозится в лабораторию. Можно собрать помет с целлофановой пленки в специальные транспортные стерильные контейнеры, которые продаются в аптеках. В крышке таких контейнеров есть специальная ложечка, которой собирается помет.
Предварительно, перед тем как стелить целлофановую пленку под жердочки, надо убраться в клетке, убрать в другое помещение корма. Но, если само помещение содержит большое количество спор грибков, то контаминация спорами из воздуха очень вероятна.
2. Контаминация спорами грибков, находящимися на зерне или на фруктах и овощах. 99% спор грибков в пищеварительном тракте птицы разрушается.
Контаминация — смешение, соединение, загрязнение. В лабораторной терминологии — попадание посторонних организмов в исследуемый материал с дальшейним влиянием на результат исследования.
На практике, чтобы в образец помета, пролежавшего на воздухе 15-20 минут, попало большое количество спор плесневых грибков, нужно чтобы их концентрация в воздухе была очень высокой. При таких концентрациях спор в воздухе помещения вероятность заражения птицы аспергиллезом очень велика. Поясню: если птица живет в помещении с очень высокой концентрацией спор грибков — она заболеет системным микозом с очень большой долей вероятности. Если из помета выделены споры грибков, то это говорит либо о том, что птица больна аспергиллезом, либо о том, что она живет в неблагоприятных условиях и может скоро заболеть.
Напомню! Плесень очень хорошо развивается под полами, под декоративными стеными панелями, между навесным потолком и основным потолочным перекрытием.
Является ли результат бактериологического анализа решающим для постановки диагноза аспергиллез птиц?
В силу своей неоднознаности, однократное выделение плесневых грибков из помета птицы не является основанием для постановки диагноза. Но если плесневые грибки выделяются из помета птицы в серии анализов и другие анализы также косвенно указывают на наличие системной грибковой инфекции — то культуральный метод служит дополнительным подтверждением наличия аспергиллеза у птицы.
Что лучше сдавать для анализа — мазки из зоба и клоаки или помет птицы?
Лучший вариант — посевы на питательные среды незамедлительно сразу после того, как мазок сделан или появился помет. В большинстве случаев посев нативных мазков от птицы — невозможен, поэтому мазок помещается в транспортную среду — контейнер, наполненный гелеобразной питательной средой, поддерживающей жизнедеятельность бактерий и грибков, но не их размножение. Обычно транспортные среды рассчитаны на хранение материала 24 или 48 часов, хотя есть и пролонгированные среды со сроком хранения до 96 часов. Транспортная среда механически разбавляет концентрацию возбудетелей в мазке и поэтому при посеве результат может быть ложноотрицательным. Также результат может быть ложноотрицательным и при превышении сроков хранения материала или при хранении патматериала при слишком высокой или слишком низкой температуре.
Поэтому предпочтительно сдавать свежий помет птицы. Кроме того, надо учитывать такой фактор: в помете всегда большее количество возбудителей, чем в мазке, и, соответвенно, большая вероятность их обнаружения.
Нет таких возбудителей болезней птиц, которые бы выделялись из клоаки и, при этом, не выделялись бы из помета.
Кроме того, это устраняет стресс и возможность травмирования птицы при процедуре взятия мазков. Многие владельцы птиц сталкивались с травмами клоаки их птиц или с перекусыванием птицами зонда во время взятия анализа.
Везти в лабораторию помет птицы нужно не нагревая его выше 36С и не замораживая.
видео развития аспергилл на питательных средах